药用植物资源与植被恢复学科组和青藏高原特色生物资源工程研究中心联合研究镰形棘豆中活性化合物分离方面取得进展

　　藏药镰形棘豆（Oxytropis falcata Bunge）（藏药名莪达夏）是豆科棘豆属多年生草本植物。生长在2700~4300 m的河滩、沙地、山坡、草甸，产于青藏高原。镰形棘豆主要具有抗炎止疼、清热解毒、止血等功效，用于利便、除毒、清肿、止血，可治疗麻风病、流感及扁桃体炎等多种病症。由于其突出的疗效，具有“草药之王”的美誉。镰形棘豆是藏医常用的三大抗炎药之一，藏医在临床上使用广泛，它是六味镰形棘豆散、九味青鹏散、奇正藏贴、奇正消痛贴膏的多种藏药复方或藏成药的主要药物，是一味非常具有研究和开发价值的天然药物。目前，镰形棘豆中活性组分与活性化合物不明确，未能阐明药效物质基础，更没有深入探讨活性成分的构效关系。因此，亟需建立镰形棘豆中活性组分与活性化合物的高效快速的分离纯化方法。

　　针对目前镰形棘豆的研究状况与存在问题，围绕镰形棘豆中活性组分与活性化合物开展研究，并取得了一些进展。

　　1.采用响应面法优化微波提取方法，并得出最佳的提取条件：微波提取功率为731w，提取时间为26min，料液比1：26，总黄酮提取率可达1.6%。采用陶瓷膜对镰形棘豆提取液进行除杂操作，同时采用大孔树脂吸附技术对陶瓷膜透过液进行富集。最终确定20%的乙醇除去杂质，并用80%的乙醇洗脱样品并收集样品溶液，获得了高含量的黄酮组分。提取工艺的优化为镰形棘豆的资源开发提供了研究基础。

　　2. 建立了高速逆流色谱方法分离纯化镰形棘豆中黄酮化合物的方法；建立了二维制备色谱分离制备镰形棘豆中黄酮化合物的方法。并对分离得到的化合物进行了抗炎活性与抗肝癌细胞活性实验，发现2,4-二羟基-查尔酮与2,4-二羟基-二氢查尔酮具有较好抗肝癌活性，抗癌作用主要是抑制早期细胞凋亡。体外抗炎实验表明镰形棘豆中黄酮类化合物均具有较好的抗炎活性，抗炎活性主要通过降低刺激细胞产生炎性介质，从而减轻炎症反应。

　　上述科研工作得到了青海省科技厅（2015-ZI-729）、中国科学院“关键技术人才”和青海省藏药药理学和安全性评价研究重点实验室的资助。

　　主要专利与论文：　　1）陈晨，李玉林，刘凤芹，等，一种从镰形棘豆中分离制备5种具有抗炎活性化合物的方法，专利号：ZL201710153628.9 　　2）陈晨，李玉林，陈涛，等，一种从镰形棘豆中分离制备5种黄酮类化合物的方法。专利号：ZL201610244243.9 　　3）陈晨，陈涛，李玉林，等，基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中化学对照品的方法，专利号：ZL201511005167.8 　　4）陈晨，李玉林，刘凤芹，等，基于平行分离模式制备色谱分离棘豆中化学对照品的方法，专利号：ZL201610646239.5 　　5）陈晨，李玉林，张得钧，等，一种黄酮类药物组合物及制备方法和用途。专利号：ZL201610244265.5 　　6）Chen Chen, et al. Efficient Separation of Five Flavonoids from Oxytropis falcata Bunge by High-Speed Counter-Current Chromatography and their Anticancer Activity. Acta Chromatographica, 2020,32,189-193. DOI:10.1556/1326.2019.00672.  　　7）Chen Chen, et al. Separation of 3-Hydroxy-3-Methylglutaryl Flavonoid Glycosides from Oxytropis falcata Using 2D Preparative Chromatography. Journal of Chromatographic Science, 2020, 58, 211-216. DOI:10.1093/chromsci/bmz091. 　　　　  　　

 

图1 HSCCC技术分离得到5种黄酮类化合物　　 　

 

 

图2 二维色谱技术分离得到黄酮类化合物　

　 　

 

图3 抗肝癌细胞活性研究